Главная страница MolBiol.ru > Орг. вопросы > Для студентов > Ферменты Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Работа с ферментами

Работа с ферментами должна соответствовать двум утверждениям: (i) обычно ферменты очень плохо переносят даже кратковременный нагрев до комнатной температуры, (ii) обычно они очень дороги.
  • Старайтесь работать с разумными аликвотами ферментов, а не с исходными пробирками. Стоковые пробирки храните в надёжном морозильнике. Достоинство аликвот - если с ферментом что то случится (загрязнение, инактивация), то будет потеряна лишь часть. Недостаток - перенос из одной пробирки в другую означает, что часть фермента останется на стенках типа и пробирки.
  • Фермент - обычно самый уязвимый компонент реакции, требующий для себя определённого pH и соли. Поэтому вносите его последним, когда все остальные компоненты уже добавлены и СМЕШАНЫ (!!!).
  • Используйте ровно необходимые (или только чуть большие) количества ферментов. Слишком большие количества ферментов опасно брать в реакцию, так как:
  • - все ферменты содержат примеси,
    - иногда избыток фермента не только бесполезен, но и вреден,
    - как уже говорилось, почти все ферменты дороги.

  • Очень плохой тон - измерять количество ферментов не в единицах активности, а в микролитрах.
  • Ферменты извлекаются из морозильника (в переносном морозильничке) непосредственно перед внесением и как можно быстрее убираются обратно. Если фермент находится в 0.5ml эппендорфе (а лучше использовать для ферментов именно эти пробирки), то нужно использовать 1.5ml охлаждённый эппендорф как адаптер.
  • Пробирку с ферментом держат пальцами с боков на том уровне, на котором раствора фермента нет.
  • Очень важно !!! Перед тем как открыть пробирку нужно сбросить её содержимое на дно кратковременным (~2-5'') центрифугированием. Этого можно не делать лишь в том случае, если вы постоянно пользуетесь этой пробиркой и уверены в том, что её никто не переворачивал "с прошлого раза".


  • Дополнения от людей знающих:
    • Не считайте a priori, что все ферменты надо хранить в морозильнике, постарайтесь получить точные сведения об условиях хранения именно того фермента, с которым работаете. Некоторые ферменты при однократном замораживании/оттаивании необратимо инактивируются. Такие ферменты, как правило, лиофилизовать тоже нельзя.



MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 11695

    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler